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原位雜交儀良好的溫度控制功能,確保FISH操作更具穩定性

2022-06-24 14:59:26

熒光原位雜交技術(shù)是一種應用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示核酸序列位置的方法。該技術(shù)問(wèn)世與70年代中期左右,其曾多于與染色體異常的研究,近年來(lái)隨著(zhù)FISH探針?lè )N類(lèi)的不斷增多,使得該技術(shù)逐步應用于各種領(lǐng)域。該技術(shù)具有快速,安全,靈敏度高以及探針可長(cháng)期保存等特點(diǎn),目前已廣泛應用于細胞遺傳學(xué),腫瘤生物學(xué),基因定位,基因作圖,基因擴增及分子診斷等領(lǐng)域。


FISH,熒光原位雜交。目前廣泛應用于:


(一)基因(或DNA片段)染色體定位和基因圖譜繪制


(二)發(fā)現染色體數目與結構異常,廣泛應用于快速產(chǎn)前診斷


(三)血液腫瘤學(xué)


(四)實(shí)體腫瘤學(xué)

熒光原位雜交儀廠(chǎng)家

對于FISH操作來(lái)說(shuō),那些因素比較重要?


在FISH中很重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著(zhù)探針和目標DNA的雜交效率;光照影響了熒光染料的強度,因此探針要避光保存,其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬滅劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關(guān)系到FISH的穩定性。


如何確保FISH操作中的溫度?


較佳的措施是使用一些FISH的專(zhuān)用儀器進(jìn)行操作,比如佰泉的原位雜交儀。如果是手工操作,首先要對FISH操作過(guò)程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控能力的檢查,如水浴鍋、孵箱,對其中不符合要求的要進(jìn)行更換(疾病診斷中的探針要求溫控精度在0.5度以?xún)龋?。其次,要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上,對于在冬季進(jìn)行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預熱以達到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計對其進(jìn)行測溫。同時(shí)檢測的樣本盡量不能超過(guò)4塊。操作中的行動(dòng)一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度,諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季,蓋玻片本身溫度就低,加之探針的量本就不多(10ul),因此事先沒(méi)有預熱的蓋玻片會(huì )使得雜交液的溫度急劇下降嚴重地影響了探針和目標DNA的雜交效率。因此對上述小部件的要進(jìn)行預熱處理,不然會(huì )影響FISH的雜交效果。


FISH 技術(shù)作為連接分子生物學(xué)與細胞生物學(xué)的橋梁地位已為世人所公認。盡管目前FISH技術(shù)無(wú)法達到完全的雜交,特別是在應用較短cDNA探針時(shí)存在雜交效率明顯下降的問(wèn)題,但隨著(zhù)各種新型分子探針以及精度更高的光學(xué)顯微鏡和功能強大的計算機分析系統的不斷問(wèn)世,上述問(wèn)題將會(huì )逐步得到解決,該技術(shù)的作用正變得日益重要,應用領(lǐng)域也得以不斷擴展。FISH技術(shù)在泌尿系統腫瘤研究領(lǐng)域的巨大潛力與光明前景將帶領(lǐng)我們進(jìn)入全新時(shí)代。

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